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济南免疫亲和柱的测定原理和操作流程

更新时间:2021-03-21点击次数:1349
   济南免疫亲和柱测定的基础是抗原抗体反应,B1单克隆抗体连接在柱内凝胶介质上,样品中的经过提取、过滤、稀释,然后将样品提取液缓慢通过免疫亲和柱,在免疫亲和柱内,与抗体结合,洗涤液通过免疫亲和柱除去未被结合的杂质。采用甲醇洗脱,然后进行相关分析。
 
  济南免疫亲和柱的操作流程:
  ①样品处理:参照各法,对样品进行处理。
 
  ②净化:
  (1)柱子预处理:取出免疫亲和柱,恢复至室温,将上端塞子取出,打开下端堵头,将柱内保存液流掉至高于凝胶上界面3-5mm处,停止流液(或将免疫层析柱直接连接于20ml注射器下)。
 
  (2)加样:加入处理好的样品液10ml,打开下端堵头,调节流速至1-2滴/秒,直至空气进入亲和柱中,弃去流出液。
 
  (3)淋洗:液体*排净后,依次用PBS缓冲液10ml、蒸馏水10ml,淋洗,流速为1-2滴/秒,弃掉流出液,抽干。
 
  (4)洗脱:加入色谱级溶液,调节流速为1滴/秒,缓慢洗脱,收集全部洗脱液,用色谱级溶液定容至1ml(即为净化后的样品)。
 
  ③检测
  净化后样品可直接用HPLC(高效液相色谱法)、GC-MS(气相色谱-质谱联用仪)、ELISA(酶联免疫吸附法)等方法进行检测。