济南免疫亲和柱的测定原理和操作流程

更新时间：2021-03-21

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　　济南免疫亲和柱测定的基础是抗原抗体反应，B1单克隆抗体连接在柱内凝胶介质上，样品中的经过提取、过滤、稀释，然后将样品提取液缓慢通过免疫亲和柱，在免疫亲和柱内，与抗体结合，洗涤液通过免疫亲和柱除去未被结合的杂质。采用甲醇洗脱，然后进行相关分析。

　　济南免疫亲和柱的操作流程：

　　①样品处理：参照各法，对样品进行处理。

　　②净化：

　　（1）柱子预处理：取出免疫亲和柱，恢复至室温，将上端塞子取出，打开下端堵头，将柱内保存液流掉至高于凝胶上界面3-5mm处，停止流液（或将免疫层析柱直接连接于20ml注射器下）。

　　（2）加样：加入处理好的样品液10ml，打开下端堵头，调节流速至1-2滴/秒，直至空气进入亲和柱中，弃去流出液。

　　（3）淋洗：液体*排净后，依次用PBS缓冲液10ml、蒸馏水10ml，淋洗，流速为1-2滴/秒，弃掉流出液，抽干。

　　（4）洗脱：加入色谱级溶液，调节流速为1滴/秒，缓慢洗脱，收集全部洗脱液，用色谱级溶液定容至1ml（即为净化后的样品）。

　　③检测

　　净化后样品可直接用HPLC（高效液相色谱法）、GC-MS（气相色谱-质谱联用仪）、ELISA（酶联免疫吸附法）等方法进行检测。